組氨酸標簽也稱His-tag,是一種簡單、應(yīng)用廣泛的純化標簽,具有六個或更多連續(xù)的組氨酸殘基,其可插入目的蛋白的C末端或N末端。一是能構(gòu)成表位利于檢測;二是構(gòu)成的結(jié)構(gòu)特征(結(jié)合配體)利于純化。His標簽我們經(jīng)常會看到,做蛋白親和純化的小伙伴們應(yīng)該就沒有沒聽過His名號的吧??墒撬烤箯暮味鴣砟??
一、起源
1975年, J. Porath等人的研究論文中,實驗者將金屬螯合親和層析(簡稱MCAC)技術(shù)應(yīng)用于蛋白分離。研究者首先將金屬離子(如Cu2+、Ni2+等)固定到IDA-衍生的凝膠上,形成金屬螯合親和層析介質(zhì)。利用這種介質(zhì),研究者進行了蛋白質(zhì)的吸附實驗,探究不同蛋白質(zhì)與金屬離子的親和性。實驗發(fā)現(xiàn),某些蛋白質(zhì)可以特異性地結(jié)合到固定化的金屬離子上,而其他蛋白質(zhì)則沒有這種結(jié)合能力。通過改變?nèi)芤旱?/span>pH值或使用競爭性配體,可以有效地從親和層析介質(zhì)上洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。這項技術(shù)利用了蛋白質(zhì)上的某些氨基酸殘基(如組氨酸、半胱氨酸、賴氨酸等)與金屬離子(如鎳、銅、鋅等)的親和作用,通過這些金屬離子固定在帶有亞氨基二乙酸(iminodiacetic acid, IDA)或其他配體的樹脂上,實現(xiàn)對蛋白質(zhì)的親和層析。這項研究成果的發(fā)表標志著親和層析技術(shù)在蛋白質(zhì)分離領(lǐng)域的應(yīng)用邁出了重要的一步。它不僅為后來的研究人員提供了一種新的蛋白純化實驗方法,而且為理解蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能提供了新的視角。
二、His tag的雛形
1988年,Smith等人提出了在蛋白質(zhì)N-末端添加特定的金屬螯合肽(Chelating Peptide, CP),以增強其與固定金屬離子的結(jié)合能力,從而提高純化效率。這種方法被稱為CP-IMAC,它通過在目標蛋白質(zhì)上引入一個CP序列,使得蛋白質(zhì)能夠通過IMAC被特異性地純化。
實驗人員設(shè)計了螯合肽His-Trp與促黃體激素釋放激素(LHRH)類似物2-10 LHRH的N-末端融合表達,結(jié)果融合蛋白可以與Ni2+形成配位復合物并具有高親和性。此外,實驗人員設(shè)計了His-Trp-胰島素原作為重組CP-蛋白質(zhì)模型,利用該模型研究了其在大腸桿菌中表達,研究其與固定化Ni2+的結(jié)合和洗脫情況。
His tag的發(fā)展
1989年,瑞典斯德哥爾摩理工學院生物化學與生物技術(shù)系Ljungquist C等人也利用基因融合方法,將目標蛋白的基因與編碼親和肽段Ala-His-Gly-His-Arg-Pro的基因片段融合,為了使表達的融合蛋白可以與固定化金屬離子(Zn2+)結(jié)合而利用親和色譜法(IMAC)進行純化,研究者合成了編碼親和肽段的連接體,以上述編碼親和肽段為基本單位,分別做兩次,四次串聯(lián)聚合,這樣制備出分別含有2個、4個和8個His氨基酸的親和肽段,然后將這肽段與編碼雙結(jié)構(gòu)域蛋白A分子ZZ的基因的3'端和編碼β-半乳糖苷酶的基因的5'端融合。研究發(fā)現(xiàn),不含有或兩個His的親和肽段的融合蛋白與固定化Zn2+的結(jié)合能力較弱,而含有4個或8個His的親和肽段的融合蛋白則顯示出較強的結(jié)合作用。通過pH梯度改變,發(fā)現(xiàn)ZZ融合蛋白可以根據(jù)親和肽His的數(shù)量多少在不同的pH值下從樹脂上洗脫,His數(shù)越多,結(jié)合力越強,洗脫的pH值越低。
三、His-tag相關(guān)產(chǎn)品推薦
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 品牌 |
11285-MX | R&D | |
11282-MX | R&D | |
11277-MX | R&D |